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          當前位置水產(chn)資料  論文解讀--異甘草甙通 今天是2024年07月21日 星期日

          論文解讀--異甘草甙通過(gu)招募巨噬細胞促進(jn)血管生成從而促進(jn)斑馬魚(y)傷口愈合

          出處水生動(dng)物健康評估公眾號 作者小破同學(xu) 水產(chn)養殖網(wng) 2020-04-06 21:38:00

          甘草在南歐和亞洲部分地區廣泛應用于治療各種疾病異甘草甙是甘草的水溶性異黃酮成分據報道異甘草甙對斑馬魚(y)胚胎受損的血管系統有額外的促血管生成作用因此可能有治療血管生成不足引起的病理疾病的潛力并推測異甘草甙可能具有促進(jn)皮膚傷口愈合的活性今天給大家分享一篇文章Isoliquiritin promote angiogenesis by recruiting macrophages to improve the healing of zebrafish wounds以斑馬魚(y)為創(chung )面愈合模型動(dng)物探索并證實(sh)了異甘草甙在皮膚創(chung )面愈合中的藥理活性并通過(gu)轉基因斑馬魚(y)胚胎來(li)闡明其潛在機制引用信息如下
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          一異甘草甙可以促進(jn)成年斑馬魚(y)傷口愈合

          為了確定傷口愈合率將6個(g)月大的野生型斑馬魚(y)分為3組每組10只所有魚(y)麻醉后在左側肛門(mn)和?#20986;?#38291;使用一次性無(w)菌活檢穿孔機打出一個(g)直徑2毫米的全層傷口實(sh)驗組分別使用100g /毫升和200g /毫升的異甘草甙溶液每天浸泡20分鐘處理7天對照組使用0.1% DMSO處理隨后分別在1357101215 dpw進(jn)行傷口檢查
          結果發(f)現所有組傷口在第三天達到最大創(chung )口面積后逐漸開(ki)始愈合圖1.B且200g/毫升的異甘草甙治療組的傷口在第5/10/15天明顯變小愈合速度更快圖1.A
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          圖1. 斑馬魚(y)傷口愈合分析

          二異甘草甙處理后斑馬魚(y)創(chung )面愈合的組織學(xu)分析
          選用創(chung )傷后第六天的斑馬魚(y)進(jn)行創(chung )面愈合的組織學(xu)分析H & E組織切片結果顯示異甘草甙處理后的斑馬魚(y)創(chung )面完全充滿(mn)了厚的上皮細胞層真皮致密而未處理的損傷組織傷口邊緣只有一層薄的上皮細胞層(新上皮)而且異甘草甙處理后的斑馬魚(y)創(chung )面肉芽組織面積也明顯小于對照組說(shu)明肉芽組織迅速退化加速了創(chung )面愈合的過(gu)程此外異甘草甙處理組的斑馬魚(y)傷口肌肉組織更為致密而對照組肌肉組織間隙較大仍處于疏松分解狀態(ti)
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          圖2. H&E組織切片含皮膚和肌肉
           (A和C)對照組未處理(B和D)為實(sh)驗組:AB: 200;C和D: 400傷口面積用虛線(xin)標出Ep:上皮細胞gt:肉芽組織小黑箭頭:薄上皮免疫細胞浸潤;粗黑箭頭:上皮?#26377;?#25104;;黃色箭頭:真皮層;紅色箭頭:真皮層分解?#21215;?#32048;胞;白色箭頭:密集排列?#21215;?#32905;細胞

          三異甘草甙能夠促進(jn)血管生成
          為觀(gun)察創(chung )面血管生成受精后4天的斑馬魚(y)內皮細胞中表達增強的綠色熒光蛋白EGFP胚胎分為3組每組35個(g)斑馬魚(y)麻醉后用針刺入與泄殖腔相對的背體進(jn)行創(chung )面誘導隨后胚胎立即轉移到新鮮的胚胎水中恢復2小時(sh)以后將斑馬魚(y)分別用100g /毫升和200g /毫升的異甘草甙溶液進(jn)浸泡對照組用0.1% DMSO處理實(sh)驗結果發(f)現與損傷2小時(sh)后的斑馬魚(y)胚胎血管長(chng)度相比異甘草甙處理組在24 小時(sh)以后血管新生長(chng)度明顯長(chng)于對照組(圖3.A)定量分析24例hpw的虛線(xin)框內血管生成率(圖3.B)兩組的血管生成率均顯著(zh)高于對照組(P < 0.001)且呈濃度依賴(li)性增高這一結果表明異甘草甙可以促進(jn)創(chung )面愈合
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          圖3. 異甘草甙能夠促進(jn)血管生成

          四異甘草甙的促炎作用
          為了闡明異甘草甙促進(jn)傷口血管生成與巨噬細胞之間的關(gun)系使用了雙轉基因斑馬魚(y)胚胎內皮細胞-綠色熒光蛋白巨噬細胞-紅色熒光蛋白進(jn)行實(sh)驗如圖4所示各組創(chung )面形成后巨噬細胞均在一定時(sh)間內被招募到創(chung )面區域對照組巨噬細胞從2小時(sh)到24小時(sh)逐漸招募聚集圖4.A而異甘草甙處理組在每個(g)時(sh)間點(din)可以觀(gun)察到有更多的巨噬細胞到達損傷部位在6小時(sh)兩種濃度的異甘草甙處理組損傷部位的巨噬細胞都顯著(zh)增加
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          圖4. 異甘草甙能夠促進(jn)血管生成

          五基因定量分析
          在24小時(sh)損傷組所有基因表達均高于非損傷組尤其是sod1tgf-,tnf-的表達,這可能表明斑馬魚(y)胚胎往往有一個(g)活躍的自愈能力血管生成相關(gun)基因vegfa和 flk-1在200g /毫升的異甘草甙溶液治療組高表達ang-2在兩種異甘草甙處理組中的表達均呈劑量依賴(li)性上調炎癥相關(gun)基因tgf-, il-1, tnf-, mmp-9, mmp-13以及抗氧化基因sod1在200g /毫升的異甘草甙溶液治療組相對于創(chung )傷對照組高表達除了mmp-9之外都呈計量依賴(li)性因此推測異甘草甙可以通過(gu)上調血管生成相關(gun)基因和炎癥基因加速炎癥反應和血管生成從而促進(jn)皮膚創(chung )面愈合
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          圖5. 基因定分析

          六結論
          綜上所述研究首次證明了異甘草甙可以促進(jn)斑馬魚(y)皮膚傷口的愈合其機制是促進(jn)炎癥反應和促進(jn)血管生成這一發(f)現豐富了甘草的藥用價(ji)值異甘草甙可以作為一種潛在的傷口愈合藥物
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          圖6.甘草及異甘草甙
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